人骨橋蛋白(OPN)酶免試驗試劑盒

（日本IBL  27158）

簡介

骨橋蛋白（OPN）來源于骨基質(zhì)，是一種分泌型糖蛋白。目前已發(fā)現(xiàn)多個細胞分泌高酸性的鈣結(jié)合的糖基化磷蛋白，包括骨細胞，腎小管細胞，巨噬細胞，活化的T細胞和血管平滑肌細胞。分子量的大小取決于其糖基化和磷酸化程度，范圍為66~44kDa

OPN的一個重要特點是含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）序列，如纖維蛋白，連蛋白和其他胞外蛋白，通過該序列可與細胞表面整合素受體結(jié)合，如αvβ3

另一重要特點，由于RNA連接，糖基化，磷酸化，硫酸化和對蛋白酶的敏感度不同，OPN在機體內(nèi)以多種分子形式存在。OPN和凝血酶同時存在于受傷，炎癥，血管再生和腫瘤組織位點。OPN易水解，這一過程可能有著重要的生理學意義。OPN片段的氨基末端含有一個隱藏的結(jié)合位點，可識別整合素α9β1，而且OPN還含有多個細胞結(jié)合位點，與多個受體反應(yīng)；這些反應(yīng)都有著不同的功能

實驗原理

此試劑盒根據(jù)酶免法的夾心原理，利用兩種不同的高特異性抗體，TMB作為著色劑，顏色強度與人OPN的量成正比

兩種抗體如下：

包被抗體：抗人OPN(O-17)兔IgG，抗體反應(yīng)部分，人OPN的N-端標記抗體

HRP標記的抗人OPN（10A16）小鼠IgG Fab’， 抗體反應(yīng)部分，人OPN凝血酶裂解位點的右側(cè)

檢測范圍

5~320ng/mL(76.9~4920pg/mL)

預(yù)期用途

僅供研究，不能用于診斷

1. 此試劑盒可用于EDTA-血漿，尿液或細胞上清中人OPN的體外定量檢測。由于OPN分子是不穩(wěn)定的蛋白，請在使用前將其儲存于-80℃，放置室溫或反復(fù)凍融會使檢測值降低

2. 建議EDTA-血漿樣品用EIA緩沖液或PBS5~10倍的稀釋，如果5~10倍的稀釋還是超出了zui高標準品值，則需進一步稀釋

3. 血清或肝素血漿樣品的檢測結(jié)果可能不是正確值，因為OPN不穩(wěn)定，易被凝血酶裂解，而且OPN分子上有若干個肝素結(jié)合位點，所以肝素血漿也會影響試驗

4. 建議尿液樣品用EIA緩沖液或PBS200倍稀釋，但各實驗室應(yīng)*化稀釋率。由于尿液樣品易分解，建議加入PMSF（蛋白酶抑制劑）等。樣品采集后不能立即檢測，應(yīng)貯存于-80℃或更低，避免反復(fù)凍融，否則其檢測值降低。尿液中OPN的量與尿液的體積成反比，建議用肌酸酐補償進行檢測

5. 細胞上清的稀釋比例因細胞而異，各實驗室以*化稀釋比例稀釋

6. 此試劑盒不能檢測凝血酶裂解的人OPN

7. 重組的和天然的人OPN都可用此試劑盒檢測

試劑盒組成

1. 包被板，96孔，包被有抗人OPN（O-17）兔IgG，親和純化

2. 標記抗體濃縮，30X，0.4mlx1，HRP標記的抗人OPN（10A16）小鼠IgG Fab’，親和純化

3. 標準品，0.5mlx2，重組人OPN

4. EIA緩沖液，30mlx1，0.05%吐溫20的PBS

5. 標記抗體稀釋液，12mlx1,1%BSA，含0.05%吐溫20的PBS

6. 著色劑，15mlx1，TMB底物液

7. 終止液，12mlx1，1N硫酸

8. 洗滌緩沖濃縮液，50mlx1, 40X，含0.05%吐溫20的磷酸緩沖液