登革熱IgG ELISA試劑盒

登革熱IgG ELISA試劑盒產(chǎn)品詳細

登革熱IgG檢測試劑盒預(yù)期用途

DENV Detect MAC-ELISA檢測試劑是一種用來檢測人是否感染登革熱病毒的ELISA檢測系統(tǒng)，登革熱IgG檢測試劑盒可以檢測出人血清中是否存在抗登革熱病毒源性重組抗原（DENVRA I-IV）的IgG抗體。此診斷實驗可輔助診斷人是否感染了登革熱病毒。此試劑盒不能用于篩查血液或血液成分，僅供科研使用。

登革熱IgG ELISA試劑盒檢測原理

DENV Detect IgG ELISA試劑盒是由一種酶聯(lián)擴大的兩步法免疫檢測系統(tǒng)。在此實驗中，將登革熱檢測陰性質(zhì)控（代表不反應(yīng)的血清）、陽性質(zhì)控和未知抗體濃度的血清樣品加入到包被了抗人IgG抗體的微孔中溫育，登革熱IgG試劑盒的血清樣品必須用樣品稀釋液進行稀釋。溫育并洗板后，用HRP標(biāo)記的DENVRA特異性抗體處理。第二次溫育并洗板后，加入TMB底物液進行溫育。之后再加入酸性終止液，450nm處測OD值可確定底物反應(yīng)的程度。當(dāng)高于一定數(shù)值時（臨界值），樣品的吸光度值可確定樣品中是否存在登革熱抗體。
注意：陰性質(zhì)控和弱陽性質(zhì)控以內(nèi)在質(zhì)控形式提供，其目的是為了監(jiān)測試劑盒成分的完整性。

登革熱IgG ELISA試劑盒成分

登革熱IgG ELISA試劑盒提供了足夠做96人份所需要的試劑。試劑盒成分如下：
登革熱檢測特定材料：
■人抗登革熱IgG抗體包被的包被板：帶板蓋的板架，登革熱IgG抗體包被的96孔包被板。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
■樣品稀釋液：1瓶，25ml，內(nèi)含0.05%的Proclin防腐劑。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：如果出現(xiàn)沉淀的話，將試管旋渦下獲得勻漿再使用。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定
■登革熱檢測陰性質(zhì)控：1支，50ul的熱滅活血清，登革熱檢測陰性質(zhì)控可輔助監(jiān)測試劑盒的完整性。-20℃至-70℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定，使用前快速旋轉(zhuǎn)試管，收集底部溶液使用。
■登革熱檢測IgG陽性質(zhì)控：1支，50ul的熱滅活血清，登革熱陽性質(zhì)控可輔助監(jiān)測試劑盒的完整性。-20℃至-70℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定，使用前快速旋轉(zhuǎn)試管，收集底部溶液使用。
■10倍濃縮洗滌液：1瓶，120ml洗滌液，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
■HRP標(biāo)記的即用型酶聯(lián)物，1瓶，6ml，HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
■Enwash：1瓶，20mlEnwash溶液。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定（內(nèi)含0.1%的Proclin）。
■TMB底物液：1瓶，9ml液態(tài)底物液，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：底物液必須始終儲存于避光試劑瓶中。
■終止液：1瓶，內(nèi)含6ml即用型的終止液，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：強酸，請戴保護手套、口罩和安全鏡，按照安全條理處理所有的材料。

登革熱IgG檢測實驗所需器材但試劑盒不提供
■可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀
■生物學(xué)或高純度水
■真空泵
■洗板機
■1-10ul的單道移液器，50-200ul的單道和多道移液器。
■聚丙烯試管
■Parafilm封口膜
■計時器
■旋渦混合器

登革熱IgG ELISA試劑盒檢測步驟

1.陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控和未知血清都必須做雙份檢測（DENV和NCA共4孔）。按照說明書上的操作流程圖進行操作。如果做雙份檢測的話，96孔板可做22個樣品。
2.將實驗中使用的板條標(biāo)記好。注意：登革熱抗原（Dengue RA）和質(zhì)控抗原（NCA）已經(jīng)綁定在微孔板中，布局描述如下：
Dengue RA：A-D 行      NCA： E-H 行
3.用試劑盒提供的樣品稀釋液將血清和質(zhì)控品稀釋100倍。用小聚丙烯試管進行稀釋，稀釋時至少需要4ul血清、陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。如：4ul血清加396ul稀釋液。
4.用單道或多道移液器將稀釋好的血清、陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控各50ul加入到相應(yīng)的微孔中。如下為22個樣品做雙份檢測時的示范圖。注意，所有的樣品都必須用DENVRA和NCA檢測。
5.用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。注意：這樣是為了保證溫度的分布在每個孔的底部和血緣相等地散播。一旦頂部密封阻礙了蒸發(fā)，任何多余的封板膠必需被剪掉。
6.37℃下保濕溫育板條30分鐘，在溫育器的底部放置水浴箱可達濕潤的作用。注意：不要將微孔板疊放，必須單獨地分層平輔。這對于溫度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何氣體，不要讓板條接觸任何濕潤的物質(zhì)，如濕紙巾等。
7.溫育后，用洗板機洗板6次，每次每孔300ul 1×的洗滌液。
8.用多道移液器在每一微孔中加入50ul HRP標(biāo)記的酶聯(lián)物。
9.用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。（同步驟5）
10.37℃下保濕溫育板條30分鐘。（同步驟6）
11.溫育后，用洗板機洗板6次。
12.用多道移液器在每一微孔中加入150ul Enwash溶液。
13.室溫下溫育（無需蓋板）5min。
14.溫育后，用洗板機洗板6次，每次每孔300ul。
15.用多道移液器在每一微孔中加入75ul TMB底物液。
16.室溫避光溫育10min。
17.溫育后，用多道移液器在每一微孔中加入50ul終止液，室溫溫育1min。
18.溫育后，450nm處測    OD值。

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