登革熱試劑操作說明書
 

目前市場上同一產品不同品牌的數量眾多，怎么識別好的產品和不好的產品呢？以及操作步驟的重要性，即使是一個好的產品，樣本處理不好也可能導致不好的結果，所以產品質量、操作細節和樣本處理也決定了實驗的成果。

科潤達生物提供的是進口的登革熱試劑，以及包裝配送了完整的登革熱試劑操作說明書，有ELISA方法檢測的登革熱試劑操作說明書和膠體金方法檢測的登革熱試劑操作說明書。并且提供體貼的售后服務，上班期間有專業的指導技術人員解答問題，產品質量優質保障，歡迎咨詢訂購。

下面介紹的是有關于德國IBL品牌采用ELISA方法檢測人血清和血漿中IgG抗體的登革熱試劑操作說明書，如有需要了解其他方法或者類型的登革熱試劑操作說明書的，可以搜索科潤達生物網站或者直接聯系我們獲取資料。

登革熱IgG檢測試劑操作說明書

登革熱IgG檢測試劑盒預期用途
登革熱IgG檢測試劑盒可用于人血清、血漿中抗登革熱病毒IgG抗體的定性檢測。

登革熱IgG檢測試劑盒檢測原理

抗登革熱病毒IgG抗體的定性酶免檢測利用的ELISA技術。微孔板上預先包被了結合樣品相關抗體的登革熱病毒2型抗原。洗板除去未結合的樣品物質后，加入辣根過氧酶標記的抗人IgG酶聯物。這一酶聯物可與捕獲到的登革熱病毒特異性抗體結合。

加入能產生藍色反應產物的TMB底物液后，如果顯示藍色則可知已形成免疫復合物。所顯示顏色的強度與樣品中登革熱病毒特異性IgG抗體的量成正比。加入硫酸以終止反應,以便產生黃色的終點顏色。用一酶標儀在450m處讀取OD值。

登革熱IgG檢測試劑盒組成成分
1、微孔板：12×8可拆板條，包被有登革熱2型抗原，真空密封于鋁鉑金屬袋中。
2、樣品稀釋液：1瓶，內含100ml樣品稀釋用緩沖液，pH2±0.2，液體為黃色，待用，白蓋。
3、終止液：1瓶，內含15ml硫酸，0.2mol/l；待用，紅蓋
4、洗滌液（20×濃縮）：1瓶，50ml，含20倍濃縮的樣品洗滌液，pH7.2±0.2，白蓋
5、酶聯物：1瓶，含20ml HRP標記的兔抗人IgG，藍色，待用，黑蓋。
6、底物液：1瓶，含15ml TMB，待用，黃蓋。
7、登革熱 IgG陽性質控：1瓶，2ml；黃色，待用，紅蓋
8、登革熱 IgG臨界質控：1瓶，3ml；黃色，待用，綠蓋
9、登革熱 IgG陰性質控：1瓶，2ml；黃色，待用，藍蓋

實驗所需材料（未提供）
1）可在450/620nm處讀數的酶標儀
2）37℃恒溫箱
3）自動或半自動洗板機
4）取樣吸頭（10µl和100µl）
5）旋渦混合器
6）去離子水或雙蒸水
7）試管
8）計時器

登革熱IgG檢測樣本要求
■樣本采集后（保存在2-8℃）應該在5小時內用于檢測，否則應該保存在-20~-70℃。避免反復凍融，不推薦使用滅活的樣本。
■樣品稀釋：樣品使用樣品稀釋液以1:101的比例進行稀釋。

登革熱IgG檢測方法
實驗開始之前仔細閱讀操作步驟，嚴格遵守操作步驟才可以獲得可靠的實驗結果。如果這實驗是在ELISA自動系統上進行，為了避免洗板的影響，我建議在洗板步驟時，洗板3次改成洗板5次，洗滌液從300µl增加到350µl。實驗開始之前，應當在試劑盒提供的結果單上標記好所有的樣品和質控品。取適當數量的板條置于板架上。

請至少做以下幾個孔：
1孔（例A1）做空白對照孔
1孔（例B1）做陰性質控
2孔（例C1+ D1）做臨界質控
1孔（例E1）做陽性質控
 

我們建議您將質控和病人樣品做雙份檢測。照說明書給出的實驗步驟進行操作，并避免不同步驟之間的時間隔無明顯差別。加每一質控品和樣品時都應當用新的取樣吸頭。把恒溫箱調至37 ± 1℃。

1）控品和已稀釋好的樣品分別100µl加入到相應的微孔中，留下A1做空白對照孔。
2）蓋板。
3）37±1℃下溫育1h±5min

4）溫育后，移去粘性金屬板，棄取孔內反應液，用300µl洗滌液洗板3次。避免反應孔中的液體濺出。每次洗板間的浸潤時間都應大于5秒。后在吸水紙上拍干。

注意：洗板步驟很重要，洗板不充分將可能導致結果不準確確或錯誤的OD值。
5）除空白孔外，在每一微孔中都加入100µl登革熱抗IgG酶標物，蓋板。
6）室溫下溫育30，避免太陽直射
7）重復步驟4
8）在每一微孔中加入100µlTMB底物液
9）室溫下（20-25℃）避光溫育15min
10）按加TMB底物液的順序和速度在每一微孔中加入100µl終止液。溫育之后，包被板內試劑的顏色由藍色變為黃色。

注意：高陽性的病人樣品會引起染色劑沉淀。這些沉淀物會影響OD值的讀取。例如：我們建議按1：1的比例用生理鹽水預先稀釋樣品。然后按1：100的比例用稀釋液稀釋樣品，并將結果乘以2。

11）加終止液后30min之內在450/620nm處讀取OD值。


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