C反應蛋白檢測試劑盒（酶聯免疫法）
（德國DRG*貨號EIA4584 規格96T）
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實驗原理
包被板上包被有抗CRP抗體，與稀釋標準品和樣本一起孵育，孵育中，CRP特異性結合包被抗體，洗板除去未結合的血清蛋白，抗原-抗體混合物與過氧化物酶酶聯物抗體反應，洗滌除去為結合酶聯物，加入含有TMB和過氧化氫的著色液孵育，與微孔板結合的免疫復合物的量與顏色強度成正比，加0.5M硫酸終止反應，450nm處檢測吸光值
以標準品濃度和OD值做標準曲線，樣本CRP濃度可直接從標準曲線上得出
此試劑盒在美國僅用于科研
 
試劑盒組成
 

1. 包被板，96孔，包被有抗人CRP單克隆抗體
2. 標準品，5瓶，0.2ml，含1/10的預稀釋標準品，濃度為：0；0.4；1；5；10ug/ml
3. 酶聯物，1瓶，12ml，含過氧化物標記的抗人CRP單抗；抗菌劑和惰性紅色染料
4. 樣本稀釋液，1瓶，40ml，5X濃縮，含0.09%NaN 3和抗菌劑，惰性綠色染料
5. 洗滌液，1瓶，50ml，20X濃縮，含磷酸緩沖洗滌液
6. 底物液，1瓶，15ml，含過氧化氫和TMB
7. 終止液，1瓶，12ml，0.5M硫酸

 
實驗所需材料但試劑盒未提供
 

1. 移液器和槍頭
2. 標準容積的潔凈玻璃器皿
3. 樣本稀釋用的潔凈玻璃試管
4. 酶標儀（450nm）

 
貯存條件
2-8℃
 

1. 將微孔板條貯存于原裝含干燥劑的密封袋內，直至全部用完
2. 不要使用過期的試劑

 
樣本采集與準備
此實驗可用到血清和血漿
采樣后立即分離出血清，避免使用溶血，脂血或黃疸血，可能回導致錯誤結果
將血清轉移干凈試管
樣本可在2-8℃下貯存幾天，或凍存更長時間，避免反復凍融
 
一般注意事項
1使用一次性加樣槍頭加樣，避免交叉污染．
2實驗前，將所有試劑平衡至室溫．試劑混勻時避免產生氣泡．
3一旦實驗開始，所有實驗步驟應中斷進行
4吸光值是孵育時間和溫度的一條函數．所以應控制好實驗加樣，建議每次只做20份樣品和一組標準品，作雙份檢測．
 
試劑準備
 
洗滌液：用去離子水稀釋50ml的洗滌濃縮液至總體積為1000ml，稀釋洗滌液可在2-8℃下至少放置1個月
 
過高溫度可能回引起濃縮洗滌液出現渾濁，其并不會有影響，稀釋后就會變澄清
 
樣本稀釋液：用去離子水稀釋40ml的樣本稀釋濃縮液至總體積為200ml，2-8℃下可放置3個月或更長時間，始終保持澄清
 
實驗步驟
 

1. 10倍預稀釋標準品血清按如下方法進行1:100稀釋：

10ul的標準品至稀釋試管內，加990ul的已稀釋的樣本稀釋液，混合
 

1. 樣本按1:1000分兩步進行稀釋：10ul的樣本血清與990ul的已稀釋的樣本稀釋液，混合；加450ul的已稀釋的樣本稀釋液與50ul的100X的預稀釋樣本，混合（注意：稀釋樣本貯存不要超過8小時）
2. 將100ul的稀釋標準品和樣本加入相應微孔內
3. 室溫下蓋板孵育30±2min
4. 洗滌緩沖液洗板3次

可選用合適的自動洗板機洗板，或手動洗板：迅速倒到孔內反應液，再注入稀釋洗滌液．第三次洗板時，讓稀釋洗滌液在微孔內停留2－3分鐘．每次洗板都要換新的稀釋洗滌液．zui后倒掉所有溶液并在吸水紙上拍干，去除殘留液滴．
 

1. 每孔加100ul的酶聯物，蓋板室溫下孵育30±2min
2. 重復步驟5）洗板
3. 每孔加100ul的底物液
4. 避光，室溫下孵育10±2min
5. 每孔加50ul的終止液
6. 加入終止液后，30min內450nm處酶標儀上讀數

 
結果分析與說明
以標準品的吸光度均值與相應的濃度建立*標準曲線．
患者樣品的濃度通過測的吸光值直接從標準曲線計算出濃度．
根據經驗或可利用的計算機方法，也可用其它數據簡化分析．
zui低檢測濃度
zui低檢測濃度約為0.02 µg/ml.
 
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