德國(guó)DRG*，貨號(hào)：EIA4424

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此試劑盒僅用于研究，不能用于診斷

此試劑盒采用的是酶免法，樣品，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和生物素標(biāo)記的抗NSE抗體在微孔內(nèi)孵育，孵育期間，特異性NSE與包被抗NSE抗體結(jié)合，未結(jié)合的NSE抗原被洗去，酶聯(lián)物加入每孔，孵育，未結(jié)合的酶聯(lián)物被洗去，結(jié)合的酶聯(lián)物的量與樣品中NSE的量成正比，加入底物液后，藍(lán)色強(qiáng)度與樣品中的NSE抗原的濃度成正比。

1.       試劑盒內(nèi)的成分完整，不同批次的成分不能混用

2.       潛在生物危害的材料：陰性和陽(yáng)性質(zhì)控基質(zhì)是人血清，標(biāo)準(zhǔn)品血清對(duì)HIV，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，但是試劑中會(huì)出現(xiàn)此類(lèi)病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除。因此，依據(jù)CDC/美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究手冊(cè)“微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室安全”，建議試劑應(yīng)視為2級(jí)生物安全處理

1.       試劑盒保存在2-8℃，微孔板裝在含有干燥劑的密封袋內(nèi)

2.       試劑盒直至有效期

3.       TMB底物液是無(wú)色的，如果溶液變藍(lán)，則應(yīng)替換，貯存和使用過(guò)程中不要將試劑暴露在強(qiáng)光下

1.       微孔板，96T，鏈霉親和素包被

2.       酶聯(lián)物和抗體液，11ml，HRP標(biāo)記的抗NSE抗體和生物素標(biāo)記的抗體液

3.       標(biāo)準(zhǔn)品，0.5ml/支，濃度范圍：5,25,50,100,200ug/ml，分裝凍存，標(biāo)準(zhǔn)品在室溫下不穩(wěn)定

4.       高和低質(zhì)控，0.5ml/支，參考值見(jiàn)標(biāo)簽，分裝凍存，質(zhì)控品在室溫下不穩(wěn)定

5.       樣品稀釋液或零標(biāo)準(zhǔn)品，11ml，

6.       TMB底物液，11ml，緩沖液內(nèi)含有過(guò)氧化氫和Tetramethylbenzidine

7.       洗滌緩沖濃縮液，10ml，100X，10ml的濃縮液+990ml的去離子水混勻即得工作洗滌緩沖液

8.       終止液，2N 鹽酸

9.       固定板，用于固定板條

1.       酶標(biāo)儀

2.       移液器  體積：25,100ul

3.       1L的洗滌瓶

樣品采集和處理

靜脈穿刺采集全血，自然凝集，室溫下離心分離出血清，貯存于無(wú)菌管內(nèi)

延長(zhǎng)全血的貯存可能會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞釋放NSE

如果血清不立即檢測(cè)的話，可在2-8℃下保存1天或是-20℃下保存30天

樣品不能反復(fù)凍融，不要將樣品放置在自動(dòng)除霜冰箱內(nèi)

不要使用脂血和溶血樣品

不建議采用血漿做實(shí)驗(yàn)，因?yàn)檠“鍟?huì)釋放NSE

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1.       實(shí)驗(yàn)前，將所有樣品，試劑平衡至室溫，混勻

2.       實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將所有試劑準(zhǔn)備好，實(shí)驗(yàn)一旦開(kāi)始，就要無(wú)中斷的完成，以得到zui可靠和一致的結(jié)果

3.       每次取樣都用新的槍頭吸取

實(shí)驗(yàn)步驟

1.       將實(shí)驗(yàn)所需板條固定好，做好樣品標(biāo)記

2.       吸取25ul的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品于相應(yīng)的孔內(nèi)

3.       每孔加入100ul的酶聯(lián)物和抗體液

4.       室溫下孵育60min

5.       棄去孵育液，每孔加入300ul洗滌緩沖液洗板5次

6.       每孔加入100ul的TMB底物液

7.       室溫下孵育30min

8.       每孔加入50ul的終止液，酶標(biāo)儀讀數(shù)

操作注意事項(xiàng)

1.       洗板，孔內(nèi)水滴要*清除

2.       所有樣品和試劑都要加入至孔底部，漩渦混合或振蕩不要求

3.       吸收值是孵育時(shí)間和溫度的函數(shù)，建議試劑和樣品加樣的時(shí)間間隔一致，無(wú)中斷

4.       基于同樣的原因，樣品數(shù)不超過(guò)20個(gè)的，標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)置雙份檢測(cè)

5.       血清樣品中NSE濃度高于200ug/L時(shí)，則需進(jìn)一步稀釋?zhuān)匦聶z測(cè)

結(jié)果計(jì)算

1.       標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為X軸，吸收值為Y軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.       按以下參考標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品NSE值（以下數(shù)據(jù)僅供參考，不能用于本次試驗(yàn)的結(jié)果計(jì)算）

 

 

 

附：采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)，只需檢測(cè)前設(shè)置好酶標(biāo)儀的相關(guān)參數(shù)，如坐標(biāo)參數(shù)（線性，半對(duì)數(shù)）和計(jì)算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對(duì)數(shù)曲線方程），即可直接得到結(jié)果

 

 

 

 

 

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