CA 72-4（化學(xué)發(fā)光法）檢測(cè)試劑盒
德國(guó)DRG*，貨號(hào)：CLA-4730
德國(guó)DRG中國(guó)*代理商“深圳科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司”竭誠(chéng)為您服務(wù)
預(yù)期用途
此試劑盒是一種用于檢測(cè)血清和血漿中CA 72-4的化學(xué)發(fā)光試劑盒，在美國(guó)僅用于研究
實(shí)驗(yàn)原理
此試劑盒采用的是化學(xué)發(fā)光免疫法，基于夾心原理
微孔板內(nèi)包被有能結(jié)合CA72-4分子上*抗原位點(diǎn)的單克隆小鼠抗體，樣品中的內(nèi)源性CA 72-4與HRP標(biāo)記的抗CA 72-4抗體共同孵育，孵育后洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物，樣品中的CA72-4的濃度與結(jié)合的酶聯(lián)物量成正比；加入底物后，發(fā)光的強(qiáng)度與樣品中的CA72-4的濃度成正比。
注意事項(xiàng)及預(yù)防措施
1. 試劑僅供專(zhuān)業(yè)人士使用
2. 試劑盒中的所有試劑包括檢測(cè)過(guò)的人血清/血漿對(duì)HIV/II，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，所有的試劑在使用和處理的過(guò)程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進(jìn)行處理
3. 開(kāi)始試驗(yàn)前，請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，確定所有的事項(xiàng)都已明白
4. 微孔板是可拆的，不用的板條應(yīng)固定在板架上，裝在密封袋內(nèi)保存于2-8℃
5. 加樣時(shí)應(yīng)按相同的順序快速加樣
6. 不同的試劑裝在不同的試劑瓶?jī)?nèi)，不能混用，如果用事先裝了酶聯(lián)物的瓶子再裝底物液，則顏色會(huì)發(fā)生變化。不要將剩余的試劑倒回原裝瓶?jī)?nèi)，以免污染
7. 充分混勻孔內(nèi)成分，以達(dá)到很好的試驗(yàn)結(jié)果。微孔板不可重復(fù)使用
8. 試驗(yàn)過(guò)程中，不要讓孔內(nèi)出現(xiàn)干燥情況，洗板步驟過(guò)后應(yīng)立即加樣
9. 試驗(yàn)開(kāi)始前，所有試劑平衡至室溫，溫度會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有影響
10. 不要用嘴吸取樣品，避免皮膚接觸到試劑和樣品
11. 實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)禁止飲食
12. 處理試劑和樣品時(shí)應(yīng)戴一次性手套。微生物污染可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果失敗
13. 按照相應(yīng)的國(guó)家生物安全管理?xiàng)l理進(jìn)行操作
14. 不要使用過(guò)期的試劑
15. 所有試劑的量都應(yīng)按說(shuō)明來(lái)，使用校正的移液器和發(fā)光儀可得到*的結(jié)果
16. 發(fā)光底物液對(duì)光敏感，應(yīng)避免陽(yáng)光直射，保存于黑暗處
17. 不要混合使用不同批次的試劑，板條。試劑盒的運(yùn)輸和貯存環(huán)境不同可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果有微小的區(qū)別
18. 有些試劑內(nèi)含有Proclin300，BND和MIT作為防腐劑，萬(wàn)一眼睛或皮膚接觸到了應(yīng)立即用水沖洗
19. 按照相應(yīng)的國(guó)家生物安全管理?xiàng)l理*的方法處理樣品和試劑
20. 有害物質(zhì)的相關(guān)信息請(qǐng)參考MSDS，產(chǎn)品的MSDS可直接向DRG索取
試劑盒組成
1. 微孔板，12x8, 96孔，可拆，包被有抗CA 72-4抗體（單克隆）
2. 標(biāo)準(zhǔn)品，0-4,5支，即用，1.0ml，濃度為：0；3；20；50；100U/ml 含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑
3. 質(zhì)控，1支，0.5ml，凍干粉，質(zhì)控值和范圍請(qǐng)見(jiàn)QC質(zhì)控單 含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑
4. 樣品稀釋液，1支，3ml，即用，含0.03%的Proclin300作防腐劑
5. 酶聯(lián)物，10X，1支，1.4ml，HRP標(biāo)記的抗CA 72-4抗體，含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑
6. 酶聯(lián)物稀釋液，1支，14ml，即用，含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑
7. 底物液
試劑A，1支，4.0ml，注意：光敏感
試劑B，1支，4.0ml，注意：光敏感
試劑C，1支，8.0ml
8. 洗滌液，1支，30ml，40X
實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒未提供
1. 發(fā)光光度計(jì)
2. 校正的移液器
3. 吸水紙
4. 去離子水
5. 計(jì)時(shí)器
6. 半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙或數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件
貯存條件
未開(kāi)封的試劑在2-8℃下可保存至有效期，不要使用過(guò)期的試劑
打開(kāi)的試劑必需保存在
2-8℃，微孔板也保存于2-8℃，一旦打開(kāi)了微孔板的袋子，需小心地將其重新密封
開(kāi)封的試劑盒如按以上描述的貯存方法可保存6周
試劑準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)前將所有試劑平衡至室溫
質(zhì)控
在凍干粉中加0.5ml的去離子水配制質(zhì)控品，放置10min，使用前反復(fù)搖勻
配制的質(zhì)控品應(yīng)分裝貯存于-20℃
洗滌液
加去離子水稀釋40X的濃縮洗滌液
30ml的濃縮洗滌液+1170ml的去離子水，即得1200ml的工作洗滌液
室溫下可保存2周
酶聯(lián)物
以1:10的比例用酶聯(lián)稀釋液稀釋
配制的酶聯(lián)物在密封容器內(nèi)于2-8℃可保存1周
例如：
如果板條全部使用，吸取1.2ml的濃縮酶聯(lián)物，加上10.8ml的酶聯(lián)物稀釋液，即得
如果板條不全使用，吸取100ul的濃縮酶聯(lián)物，加上0.9ml的酶聯(lián)物稀釋液，即得
相關(guān)酶聯(lián)物制備見(jiàn)下表
| 板條數(shù) | 酶聯(lián)濃縮物 （ul） | 酶聯(lián)稀釋液 （ml） |
| 1 | 100 | 0.9 |
| 2 | 200 | 1.8 |
| 3 | 300 | 2.7 |
| 4 | 400 | 3.6 |
| 5 | 500 | 4.5 |
| 6 | 600 | 5.4 |
| 7 | 700 | 6.3 |
| 8 | 800 | 7.2 |
| 9 | 900 | 8.1 |
| 10 | 1000 | 9.0 |
| 11 | 1100 | 9.9 |
| 12 | 1200 | 10.8 |
化學(xué)發(fā)光底物液
試劑A和試劑B混合，然后以1:2的稀釋比例用試劑C稀釋?zhuān)吹眉从玫牡孜镆?/div>
現(xiàn)配現(xiàn)用，只能保存1小時(shí)
如果所有板條都使用，則試劑A和試劑B各3ml混合+6ml的試劑C
樣品采集和準(zhǔn)備
試驗(yàn)可采用血清和肝素血漿
檸檬酸鹽血漿值減小，EDTA血漿值增高
不要使用溶血，黃疸或脂血的樣品
樣品采集
血清
靜脈穿刺采血，允許凝集，室溫下離心分離出血清。未*凝固時(shí)不可進(jìn)行離心。接受了抗凝劑治療的捐獻(xiàn)者的血液凝集時(shí)間更長(zhǎng)
血漿
將全血收集到含有抗凝劑的離心管內(nèi)，采集后立即離心
樣品貯存和準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)前，將樣品蓋上蓋子，貯存于2-8℃，可保存5天，想保存更長(zhǎng)時(shí)間則需凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融
樣品稀釋
在zui初的試驗(yàn)中，如果樣品濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品濃度，則應(yīng)用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋
結(jié)果計(jì)算時(shí)應(yīng)乘以稀釋因子
例如：
A）1:10稀釋 10ul血清+90ul樣品稀釋液（充分混勻）
B）1:100稀釋 10ul稀釋液A）1:10+90ul樣品稀釋液（充分混勻）
實(shí)驗(yàn)操作
操作注意事項(xiàng)
1. 實(shí)驗(yàn)前將所有試劑平衡至室溫，混勻，不產(chǎn)生氣泡
2. 實(shí)驗(yàn)一旦開(kāi)始，所有步驟必須完整的進(jìn)行下去
3. 避免污染試劑，槍頭和微孔/管。每個(gè)微孔的加樣都應(yīng)該用新的槍頭，避免交叉污染
4. 實(shí)驗(yàn)前將所有試劑準(zhǔn)備好，蓋子打開(kāi)，所需板條固定等，這樣可以確保每個(gè)步驟間隔時(shí)間一致，無(wú)中斷。
5. 酶免反應(yīng)中時(shí)間和溫度成線性關(guān)系
實(shí)驗(yàn)步驟
每次檢測(cè)都應(yīng)建立一標(biāo)準(zhǔn)曲線
1. 將實(shí)驗(yàn)所需板條固定于板架上
2. 加25ul的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品于相應(yīng)的孔內(nèi)
3. 每孔加100ul現(xiàn)配的酶聯(lián)物，充分混勻10秒，充分混勻這一步很重要
4. 室溫下孵育60min
5. 棄去孔內(nèi)廢液，每孔400ul的洗滌液洗板5次，吸水紙上拍干
重要提醒：洗板過(guò)程直接會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)的靈敏度和度
6. 每孔加100ul現(xiàn)配的底物液
7. 室溫下孵育10min
8. 加入底物液20min內(nèi)在發(fā)光光度計(jì)上讀數(shù)
結(jié)果計(jì)算
1. 計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品的RLU平均值
2. 在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上，以標(biāo)準(zhǔn)品的RLU的均值為Y軸，濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上通過(guò)RLU均值找到相對(duì)應(yīng)的濃度值
4. 全自動(dòng)法：自動(dòng)法用zui合適的4參數(shù)對(duì)數(shù)擬合法計(jì)算，它是計(jì)算方法，其他方法得出的結(jié)果可能會(huì)有細(xì)微的區(qū)別
5. 樣品濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取，樣品濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品濃度的則需進(jìn)一步稀釋?zhuān)蛴涗洖椋?00U/ml。結(jié)果計(jì)算時(shí)要乘以稀釋因子
使用局限性
試驗(yàn)中嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作和良好的實(shí)驗(yàn)操作習(xí)慣可得到*試驗(yàn)結(jié)果
任何不恰當(dāng)?shù)奶幚砘蛟囼?yàn)步驟的改動(dòng)都會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響
干擾底物
以下物質(zhì)低于下面所述濃度，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果都會(huì)不明顯
| 血紅蛋白 | 4mg/ml |
| 膽紅素 | 0.5mg/ml |
| 甘油三酯 | 7.5mg/ml |
藥物干擾
目前為止還沒(méi)有一種藥物對(duì)CA 72-4檢測(cè)會(huì)產(chǎn)生影響
本譯文僅供參考，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)
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