新喋呤 ELISA 簡明操作說明
（德國IBL原裝）RE:59321
新喋呤生物合成與細胞免疫系統的活性關系密切，據報道在病毒感染病人新喋呤升高，認為升高源于直接防御病毒感染細胞的免疫應答。已證實抗原刺激人外周血單核細胞可引起新喋呤釋放入細胞培養液中，人巨噬細胞在體外培養時受γ-干擾素刺激產生新喋呤。人體液中新喋呤水平的測定為細胞介導免疫的相關疾病監測提供了一種有用和創新的工具。許多傳染病，新喋呤水平升高先于臨床表現和血清變化。通常樣本不會進行所有可能的傳染病測定，因此為了降低輸血傳染的危險性，對獻血員樣本進行新喋呤測定是有意義的。
測定新喋呤的其它診斷應用有：
l 重復損傷的ICU病人
l 用于預測HIV感染和惡性疾病
l 移植手術后病人并發癥的早期預測
l 自身免疫性疾病、疾病活動的指征
l 病毒感染的診斷
l 急性病毒和細菌感染的鑒別診斷
l 慢性感染復發和免疫刺激治療的監測
實驗原理
本試驗應用競爭ELISA原理
一． 試劑準備（以32個樣本測試配制）
1． 洗滌緩沖液：加15ml濃縮液至干凈的容器中加雙蒸水至300ml（1：20稀釋）2—8℃貯存。
2． 酶聯結物：25ul濃縮液加入5ml實驗緩沖液（1：201稀釋），2—8℃zui多貯存24小時。
3． TMB底物液：用9ml TMB底物緩沖液稀釋300ul濃縮液。（1：31稀釋）2—8℃可保存48小時。
二． 樣本收集及貯存
1． 樣本、血清，EDTA 抗凝血漿
2． 貯存 2--8℃24小時
-20℃ 長期貯存，避光保存避免反復凍溶。
三． 實驗步驟
整個實驗過程應避免陽光直射，將試劑盒平衡至室溫。
1． 加10 ul標準品、樣本或質控于相應反應孔中。
2． 加50ul新喋呤抗血清于各孔中。
3． 加100ul酶聯物。
4． 用封板紙封板后，室溫（20-25℃）振蕩（500轉/分），90分鐘。
5． 棄去孔中液體，洗板3次。
6． 加200ul TMB底物液于各孔中。
7． 室溫（20-25℃）避光放置10分鐘。
8． 以加TMB 底物液的順序加100ul終止液于各孔中。
9． 混勻后15分鐘內450 nm讀吸光度。
注意：洗滌過程對實驗結果是重要的。
從標準曲線上可以直接查到樣本的結果。樣本OD值高于zui大的標準品。應將樣本用實驗緩沖液稀釋后檢測，結果應乘以稀釋倍數。
四． 期望值
血清正常值 小于10nmol/L（2.5ng/ml）
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。
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